市面上常見(jiàn)的玻璃底培養皿，通常是在塑料培養皿底部打個(gè)洞，再將厚度為170-220μm的蓋玻片或細胞爬片用無(wú)影膠水或硅膠粘于培養皿設備底部。并不是整個(gè)培養皿的底部都是玻璃材質(zhì)的。適用于觀(guān)測的區域僅僅在打孔的區域。但是由于玻璃的疏水性，往往在培養細胞的時(shí)候，細胞不能在玻璃上很好地貼壁，生長(cháng)狀態(tài)并不好，甚至在做共聚焦掃描成像的時(shí)候發(fā)生細胞脫片的現象。

      想要細胞好好貼壁，所使用的玻璃底培養皿進(jìn)行細胞培養之前，要確認已經(jīng)包被了特定的蛋白試劑。

      培養不同的細胞，需要的包被試劑也不同。同時(shí)，因為用于包被的蛋白是生物產(chǎn)物，所以不同公司的包被蛋白的產(chǎn)品純度和用量都是不同的，本技術(shù)帖只是提供參考，具體的包被試劑用量還是要參考所用品牌的說(shuō)明書(shū)。并且最好以自己所用的試劑先做一個(gè)梯度實(shí)驗，找出最適合的包被濃度。

      PLL包被適用于絕大多數細胞，尤其適用于中樞系統神經(jīng)元的培養。在使用時(shí)需要使單位面積上的蛋白含量（μg/cm2）達到理想的量。本例中PLL推薦包被的用量為 2μg/cm2。需要根據包被面積，包被體積，來(lái)計算所需要蛋白質(zhì)的量。

      比如：35mm玻璃底培養皿，細胞生長(cháng)面積是3.5cm2，包被面積是4.1cm2，包被液體積是400μl，那根據推薦用量2μg/cm2。那么單孔中需要8.2μg的PLL，如果只加入400μl的PLL溶液，那PLL的溶液濃度為20.5μg/ml（約為 20μg/ml）。所以，需要用超純水將原液進(jìn)行稀釋。

      具體步驟：

      1.使用超純水按照1:5稀釋PLL原液。

      2.在每個(gè)35mm玻璃底培養皿中加入400μl的PLL稀釋液。

      3.室溫孵育1-2小時(shí)，吸出PLL稀釋液。

      4.使用2ml PBS溶液或無(wú)血清培養基小心的清洗3次，吸盡清洗液。

      5.直接加入細胞懸液進(jìn)行培養。

      方法評價(jià)：由于各種包被蛋白的性質(zhì)不同，不同的包被蛋白使用方法也不一樣。經(jīng)常由于需要對玻璃底培養皿包被，而產(chǎn)生了新的污染。而且污染往往是開(kāi)始養細胞了以后才會(huì )發(fā)現，這樣不僅耽誤了時(shí)間，而且也浪費了試劑盒耗材。畢竟包被蛋白試劑和質(zhì)量有保證的玻璃底培養皿價(jià)格也是不菲的（質(zhì)量不過(guò)關(guān)的玻璃底培養皿有可能會(huì )因為膠水沒(méi)有粘勻而漏液或者使用的膠水對細胞有毒性）。